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Concentrations de médicaments antirétroviraux et ARN du VIH dans le tractus génital de femmes infectées par le VIH recevant un traitement antirétroviral hautement actif à long terme

Objectif Notre objectif était de déterminer les concentrations de médicaments antirétroviraux et le virus de l’immunodéficience humaine Relèvement de l’ARN VIH dans le liquide cervico-vaginal CVF par rapport au plasma sanguin BP chez les femmes recevant un traitement antirétroviral hautement actif suppressif HAARTMéthodes Trente-quatre femmes infectées par le VIH ayant des taux plasmatiques d’ARN VIH On a déterminé 68 concentrations de médicaments CVF et BP et les niveaux d’ARN du VIH avant et après l’administration du médicament. Pour chaque femme et chaque médicament antirétroviral, les ratios de concentration de médicaments CVF: BP avant et après l’administration du médicament étaient les suivants: Le test de Wilcoxon non paramétrique a été utilisé pour déterminer si ces résultats différaient des résultats Lamivudine administré aux patients et ténofovir administré à des concentrations significativement plus élevées dans CVF que dans BP avant l’administration du médicament, avec CVF: BP rapports de concentration de% intervalle de confiance , – et% intervalle de confiance, -, resp L’ecfavirenz administré aux patients et le lopinavir administré avaient des concentrations significativement plus faibles dans le CVF, avec des rapports de concentration CVF: BP du% intervalle de confiance, – et -, respectivement pendant l’intervalle médian après l’enrôlement, mois, BP et CVF VIH détectable Malgré des concentrations plus faibles en CVF des principaux composants HAART, tels que l’éfavirenz et le lopinavir, le rebond virologique était rare. Les fortes concentrations de ténofovir et de lamivudine dans le CVF peuvent avoir des implications sur la prévention de la transmission sexuelle pendant la multithérapie et la multithérapie. pour la prophylaxie pré-exposition ou post-exposition

La thérapie antirétrovirale combinée et la zidovudine en monothérapie ont été associées à un risque réduit de transmission maternelle de l’infection par le VIH De plus, l’utilisation du HAART dans des communautés définies a été associée à une transmission sexuelle réduite de l’infection par le VIH. est probablement attribuable, en partie, aux réductions associées au traitement des charges de VIH dans les voies génitales, car la transmission est censée se produire par contact direct avec le virus dans le tractus génital Les réductions des taux d’ARN du VIH dans le liquide cervicovaginal CVF ont On a cependant observé au fil du temps une discordance dans la réplication virale et l’émergence de variants pharmacorésistants entre le sang et les compartiments de l’appareil génital On ne sait pas si cette discordance la réplication virale est le résultat de différences dans les concentrations de médicaments antirétroviraux et de la pression sélective antivirale locale dans les différents Le traitement HAART initial standard est composé d’inhibiteurs nucléosidiques de la transcriptase inverse NRTI plus un inhibiteur de protéase PI ou un inhibiteur non nucléosidique de la transcriptase inverse NNRTI Une combinaison triple de médicaments d’au moins classes est conçue pour obtenir une suppression maximale de la réplication virale. On pense que le virus libre dans le tractus génital provient à la fois de la transsudation BP du plasma sanguin et de la réplication et de l’évolution virale locales indépendantes [,,,] Par conséquent, on s’attendrait à une pénétration de tous les composants du régime à des concentrations suffisantes pour inhiber la réplication virale serait nécessaire pour prévenir l’émergence de variants pharmacorésistants pendant la multithérapie antirétrovirale Des études antérieures ont trouvé des concentrations plus faibles de certains IP et NNRTI dans le CVF, comparées aux niveaux de BP données publiées sur les concentrations d’INTI dans les CVF De plus, les données sur les L’objectif de cette étude était d’évaluer les concentrations de médicaments antirétroviraux CVF et BP appariés et de mettre en corrélation les concentrations locales de médicaments avec le rebond de l’ARN du VIH chez les patients recevant un traitement antirétroviral à long terme.

Patients, matériaux et méthodes

ea et Chlamydia trachomatis Des examens pelviens et des tests pour les infections du tractus génital ont été effectués, et des échantillons appariés BP et CVF ont été obtenus lors de toutes les visites d’étude par Sno-strips [Akorn] ou Tear Flo [Hub Pharmaceuticals]. la mesure des concentrations de médicament et l’ARN quantitatif du VIH pourraient être programmés à tout moment dans les mois suivant l’inscription, avec un délai moyen d’échantillonnage de mois médian à l’échantillonnage, mois; Le jour de l’échantillonnage, les patients se sont présentés à la clinique avant la dose matinale de médicaments. Des échantillons CVF et sanguins ont été prélevés avant et après l’administration du médicament antirétroviral. L’échantillon de sang a été prélevé d’abord, puis la CVF a été prélevée. recueilli dans le min après prélèvement sanguin CVF du fonix postérieur du vagin a été recueilli avec un aspirateur volumétrique vaginal et transféré à -mL cryovial et congelé à-° C jusqu’à l’expédition pour les tests Environ mL de sang a été recueilli dans des vacutainers contenant de l’EDTA et centrifugé Détermination de la concentration de médicaments Les concentrations de médicament dans BP ont été mesurées en utilisant une chromatographie liquide haute performance validée avec des méthodes de détection UV. Les niveaux inférieurs ont été mesurés à la température ambiante. La limite de quantification des échantillons plasmatiques était de ng / mL pour l’emtricitabine, le ténofovir, la lamivudine, la zidovudine, la didanosine, acavir, et stavudine et ng / mL pour le fosamprénavir, l’éfavirenz, le lopinavir, le sulfate d’atazanavir, le ritonavir et le nelfinavir. Les concentrations de CVF ont été quantifiées à l’aide d’une chromatographie en phase liquide à haute performance validée. dosage simultané pour les médicaments antirétroviraux Les échantillons ont subi une extraction en phase solide en utilisant des colonnes Bond Elut C- Varian, comme décrit par ailleurs Cimétidine dans un tampon acétate; Le pH a été utilisé comme étalon interne et a été appliqué directement sur la colonne conditionnée avant l’introduction du CVF. Une pompe binaire Agilent Agilent et un échantillonneur automatique thermostaté par thermostat HTC Pal Technologies LEAP connectées à un spectromètre de masse quadruple quadruple API Applied Biosystems et une source d’ions Turbospray Applied Biosystems avec une colonne Aquasil C Thermo-Electron a été utilisée pour l’analyse. La surveillance des réactions multiples et la commutation de polarité positive à négative ont été utilisées: les analytes stavudine, didanosine et zidovudine ont été contrôlés en mode négatif et les analytes restants ont été surveillés en mode positif. les limites de quantification dans le CVF étaient de ng / mL pour le fosamprénavir, la névirapine, le nelfinavir et l’abacavir; ng / mL pour l’éfavirenz, l’emtricitabine et le ténofovir; ng / mL pour le lopinavir; ng / mL pour la lamivudine, la zidovudine, la didanosine et la stavudine; et ng / mL pour le ritonavir La précision globale du test, exprimée en coefficient de variation, était de% -% et la précision était de% -% Récupération pour les médicaments étudiés allant de% pour ritonavir et lopinavir à% pour lamivudine, didanosine et abacavir. Les travaux ont été effectués par le Centre de recherche clinique et de chimie analytique de l’Université de Caroline du Nord Core Chapel Hill, Caroline du Nord, qui participe à des essais trimestriels nationaux et internationaux de compétence externe Ces résultats démontrent constamment des niveaux élevés d’exactitude et de précision. tests antirétroviraux Détermination de l’ARN du VIH Amplification basée sur une séquence d’acide nucléique bioMerieux a été utilisée pour mesurer les niveaux d’ARN VIH Tous les résultats sont exprimés en copies par ml, avec une limite inférieure de détection des copies / mL pour BP et des copies / mL pour CVF collectées par Sno-stripsStatistical analyse Les concentrations de médicaments antirétroviraux dans les paires d’échantillons d’organes génitaux et de PA de chaque femme ont été examinées. le résultat était inférieur à la limite de détection, la concentration était fixée à ng / mL Lorsque le résultat était inférieur à la limite de quantification mais au-dessus de la limite inférieure de détection, la concentration était fixée à% de la limite inférieure de quantification. Comme prévu, les concentrations ont montré une distribution asymétrique, attribuable à des concentrations très élevées et une limite inférieure de zéro. Pour chaque femme et médicament antirétroviral, nous avons calculé le ratio de la concentration du médicament dans le tractus génital à la concentration du médicament dans le PB à chaque période de temps Ratios & gt; Les moyennes et les IC des ratios ont été estimés à l’aide du test t de Student. Le test de Wilcoxon non paramétrique a été utilisé pour déterminer si les ratios étaient différents de compartiments biologiques à chaque période de temps ou si les concentrations étaient différentes dans le tractus génital après l’administration du médicament, par rapport à avant l’administration La signification statistique a été déterminée au niveau a =

Résultats

Caractéristiques des patients Au cours de la période d’étude, les femmes ont répondu aux critères de sélection et ont été recrutées. Parmi ces femmes,% n’ont pas terminé la visite d’étude pour l’échantillonnage des concentrations de médicaments et ARN VIH quantitatif de ces patients, retirées de l’étude , a eu des conflits d’horaire, a quitté l’État, a été incarcéré, et est mort.Sur les femmes qui ont terminé l’étude, l’âge médian était de plusieurs années, les années,% étaient noirs,% étaient blancs non hispaniques,% étaient hispaniques, et% Cinquante-neuf pour cent des patients avaient un nombre de cellules CD de – cellules / mm, et% comptaient ⩾ cellules / mm Trente-deux pour cent des patients étaient séropositifs pour l’IgG du virus de l’herpès simplex,% avaient des résultats de test qui étaient positifs pour la vaginose bactérienne, et% avaient des résultats de PCR qui étaient positifs pour le virus de l’herpès simplex dans la table CVF Trente patients% ont reçu au moins NRTI plus un IP ou un INNTI,% ont été donnés ou INTI, et seul% patient a reçu un à ne pas contenir d’INTI Le ritonavir a été administré pour stimuler les autres IP chez tous les patients sauf chez les patients sauf chez les patients recevant soit la lamivudine n = soit le ténofovir n = ou les deux n = dans leur régime de traitement; des autres femmes ont reçu de l’emtricitabine et ont reçu un traitement non fondé sur les INTI

Tableau View largeTélécharger slideParticipant données démographiques et caractéristiques cliniques à baselineTable View largeTélécharger slideDonnées démographiques et caractéristiques cliniques des participants au départAttractions médicamenteuses antirétrovirales dans BP et CVF Un total de spécimens ont été prélevés sur chacune des femmes, qui prenaient un total de différentes combinaisons antirétrovirales. des femmes prenant chaque médicament allait de la névirapine à la lamivudine Résultats des tests et% IC associés aux antirétroviraux avec & lt; les échantillons n’ont pas été considérés comme fiables; ils sont inclus dans les tableaux en tant qu’information préliminaire. De plus, les concentrations de zidovudine dans la FCV étaient inférieures à la limite de quantification. ng / mL avant l’administration du médicament; des concentrations de BP étaient inférieures à la limite de détection, étaient inférieures à la limite de quantification & lt; ng / mL, et étaient & lt; ng / mL En conséquence, nous n’avons pas pu comparer les concentrations de CVF et de BP de zidovudine avant l’administration du médicament. Enfin, dans les instances, les IC% pour les ratios incluent la valeur, mais la valeur P est indiquée comme étant & lt; De telles incohérences sont attendues, car différentes méthodes ont été utilisées pour construire les CI et effectuer des tests de signification. Le test de Wilcoxon est non paramétrique, fait moins d’hypothèses distributionnelles que le test t de Student, et est un test conservateur de signification. La lamivudine administrée aux patients et le ténofovir administré avaient des concentrations significativement plus élevées dans le CVF que dans le PB à la fin de l’intervalle posologique, avec un CVF moyen: BP à la fin de l’intervalle posologique avant la prise du médicament. D’autre part, l’éfavirenz administré aux patients et le lopinavir administré avaient des concentrations significativement plus faibles dans les échantillons CVF que dans les échantillons BP appariés, avec des ratios CVF: BP moyens de concentration de%. CI, – et% IC, -, respectivement, Tous les autres IP et INNTI avaient des concentrations plus faibles en CVF, comparé les concentrations dans BP, avec les ratios de concentration CVF: BP & lt; mais avec des différences statistiquement insignifiantes

Tableau View largeTélécharger diapositive État des concentrations de médicaments antirétroviraux à la fin d’un intervalle de dosage – hTable View largeTélécharger diapositive État actuel des concentrations de médicaments antirétroviraux à la fin d’un intervalle de dosage – hLes concentrations moyennes de chaque médicament dans CVF et BP – h après administration sont indiquées Dans le tableau, l’abacavir, l’éfavirenz, le ritonavir et le lopinavir présentaient des concentrations significativement plus faibles de CVF que de BP-h après l’administration, avec des ratios CVF: BP significativement & lt; Les ratios CVF: BP concentration de médicament ont diminué pour tous les médicaments sauf l’éfavirenz, le lopinavir, le nelfinavir et la névirapine après l’administration, ce qui indique que la plupart des médicaments s’accumulent plus rapidement dans la PA que dans la CVF

Tableau View largeTélécharger diapositive État actuel des concentrations de médicaments antirétroviraux – h après l’administrationTable View largeTéléchargement diapositives État actuel des concentrations de médicaments antirétroviraux – h après l’administrationRétrovirage antirétroviral chez les patients atteints de BP et CVF Au moment de l’échantillonnage, des patients présentaient des ARN viraux détectables. / mL Des patients qui avaient une faible virémie plasmatique lors de la visite d’étude, avaient complètement supprimé les charges virales plasmatiques lors des visites suivantes, ont ensuite connu un échec du traitement en raison de la non-observance du traitement et les données n’étaient pas disponibles pour les patients. visite de suivi Seul un pourcentage de patients avait un taux détectable d’ARN du VIH de copies / ml dans l’échantillon CVF au moment de l’échantillonnage par paires; Au moment de l’évaluation, le patient recevait de la didanosine, de la lamivudine et de l’éfavirenz et il a été noté que le traitement ne donnait pas lieu à un traitement. La concentration de didanosine avant l’administration était inférieure à la limite de Les concentrations d’efavirenz étaient faibles, comparées à la concentration moyenne observée chez tous les patients, en BP ng / mL vs ng / mL et en CVF ng / mL vs ng / mL. Cependant, la concentration de lamivudine l’échantillon de PA du patient était plus élevé que la concentration moyenne observée pour tous les patients ng / mL vs ng / mL

Discussion

On pense que la suppression maximale de la réplication virale dans le tractus génital est essentielle pour prévenir l’évolution et la transmission du virus pharmacorésistant pendant la multithérapie. La capacité des composants d’un régime triple médicament à atteindre les voies génitales à des concentrations adéquates pour inhiber la réplication virale locale peut Il est important de prévenir l’évolution des variants pharmacorésistants du VIH dans les voies génitales pendant le traitement antirétroviral hautement actif, car il a été démontré que la réplication du VIH était compartimentée sur ce site [,,,] Il peut aussi être souhaitable que les antirétroviraux ou la prophylaxie de l’exposition post-sexuelle pénètrent et s’accumulent en concentrations élevées dans le CVF, qui est le site probable d’exposition et d’infection initiale. Cette étude a examiné les concentrations de composants de HAART dans le CVF des femmes qui avaient obtenu une excellente suppression virale chez BP. pour corréler les concentrations locales de médicament avec le rebond virologique ultérieur En général, les INTI ont démontré une bonne pénétration dans le CVF, avec lamivudine et ténofovir atteignant des concentrations de CVF proches de leur concentration en BP à la fin de l’intervalle posologique L’excellente accumulation de ces agents dans le CVF peut être bénéfique pour la prévention de la transmission du VIH pendant la multithérapie exposition post-sexuelle prophylaxie antirétrovirale D’autre part, l’accumulation sélective d’INTIs mais pas les IP ou NNRTI dans le CVF peut fournir un environnement pour la sélection des variants pharmacorésistants dans ce compartiment. La transmission des variants VIH antirétroviraux résistants aux médicaments a été montrée Cependant, il n’est pas clair si les souches pharmacorésistantes proviennent des voies génitales ou systémiques. De plus, le mécanisme sous-jacent de l’effet protecteur de la thérapie antirétrovirale contre la transmission verticale de Le VIH n’est pas bien compris, car une thérapie qui a supprimé au maximum la réplication virale chez BP a démontré le meilleur La zidovudine en monothérapie qui n’a pas eu d’effet soutenu significatif sur les charges virales BP a également réduit la transmission Nos données ont également confirmé que les IP et les NNRTI pénètrent mal dans le CVF, comme A la fin de l’intervalle posologique, les concentrations de ces classes de médicaments dans CVF étaient seulement de% -% des concentrations dans l’association BP Efavirenz et lopinavir, qui ont été prescrits à% des patients, atteints moins Concentrations pré et postdose dans CVF, comparées à BP Malgré les concentrations plus faibles de ces agents dans CVF, une suppression soutenue des niveaux d’ARN VIH a été observée dans le compartiment génital Il est possible qu’il y ait eu un biais dans notre étude, car nous nous sommes inscrits seulement les femmes qui avaient atteint la suppression maximale du virus pendant au moins deux mois, et la période de suivi était relativement courte, la durée médiane, les mois. Nous ne pouvions pas déterminer la relation concentrations de médicaments CVF et rebond viral, car il y avait seulement patient avec VIH RNA rebond dans le compartiment génital Les autres chercheurs ont proposé que l’échec de supprimer complètement les niveaux d’ARN VIH VIH, plutôt que les concentrations de médicaments CVF, est le principal déterminant de l’appareil génital viral excrétion Alternativement, il est également possible qu’une concentration adéquate en médicaments des IP et NNRTI soit atteinte au niveau du site intracellulaire de la réplication du VIH, comme démontré dans les études qui ont examiné la pharmacocinétique intracellulaire Nous reconnaissons que ces données ont des limites. être interprété avec prudence, en particulier pour les médicaments qui ont été administrés à & lt; En second lieu, l’échantillonnage pour la mesure des concentrations de médicament et des charges virales a été effectué uniquement pendant la période d’étude de mois et seulement pendant la période d’exposition aux médicaments pendant l’intervalle de dosage. Enfin, nous n’avons pas mesuré les concentrations intracellulaires de médicament. la forme triphosphate des INTI, qui sont importants pour l’action pharmacologique Nonobstant ces limites, nos données démontrent que la lamivudine et le ténofovir s’accumulent bien dans le tractus génital féminin et peuvent être utilisés comme traitement d’association pour réduire la transmission sexuelle du VIH. En outre, malgré des concentrations plus faibles d’IP et de NNRTI dans le CVF, comparativement aux concentrations dans BP, nous n’avons trouvé aucun rebond virologique dans les voies génitales des patients ayant des charges virales indétectables dans BP pendant une période de suivi médiane de ~ mois

Remerciements

Nous remercions les patients qui ont participé à cette étude. Soutien financier Instituts nationaux de la santé R AI et K AI à S Cu-Uvin; K AI à A Kwara, Centres pour la recherche sur le SIDA à Lifespan / Université Brown / Tufts PAI, PAI Université Emory, et Université de Caroline du Nord Conflits d’intérêts PAIPotentiel A Kwara a reçu un financement de recherche de Bristol-Myers Squibb et est membre du Bureau des conférenciers pour Bristol-Myers Squibb et Gilead AMC siège aux conseils consultatifs scientifiques de Merck, de Roche Diagnostics, de Bayer Diagnostics, d’EraGen, de Focus et d’AcroMetrix et a reçu des honoraires d’Abbott Molecular A Kashuba a reçu des fonds de recherche de Bristol-Myers Squibb. Pfizer et Boehringer Ingelheim; est membre du comité consultatif de Bristol-Myers Squibb; et est un membre du bureau du conférencier pour Bristol-Myers Squibb S Cu-Uvin a reçu un financement de recherche de Bristol-Myers Squibb; siège aux conseils consultatifs de Boehringer Ingelheim, de Bristol-Myers Squibb et d’Evo Pharmaceutical; est membre du bureau du conférencier de Boehringer Ingelheim; et a reçu des honoraires de Glaxo SmithKline et Merck Tous les autres auteurs: aucun conflit

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