Menu

Maria Selma Restaurant

Etude multicentrique d’un dosage moléculaire rapide pour le diagnostic de la colonisation du streptocoque du groupe B chez les femmes enceintes

Contexte La prévention actuelle de l’infection due au streptocoque du groupe B consiste à administrer des antibiotiques intrapartum aux femmes en fonction du statut de colonisation de la culture prénatale ou de facteurs de risque. Méthodes Nous avons comparé prospectivement les caractéristiques d’un test de diagnostic moléculaire rapide IDI-Strep B; Infectio Diagnostic avec culture pour la détection GBS intrapartum après semaines de gestation dans les centres nord-américains pendant la période de septembre -May Antenatal dépistage du GBS a été fait selon la pratique habituelle des hôpitaux participants Deux échantillons combinés vaginal / anal ont été obtenus des participants pendant le travail par utilisation de Les échantillons ont été traités simultanément par culture et avec IDI-Strep B Les échantillons prélevés ont été randomisés pour l’ordre des tests des échantillons sur écouvillon par culture ou les résultats de test rapide des femmes enrôlées, Le taux de colonisation par GBS intrapartum par culture était de% range,% -% Comparé à la culture intrapartum, le test moléculaire avait une sensibilité de% range,% -%, spécificité de% range,% -%, predictive positive valeur de% range,% -% et valeur prédictive négative de% range,% -% Le test moléculaire était supérieur à sensibilité aux cultures prénatales,% vs%; P & lt; et la prédiction du statut intrapartum sur la base de la sensibilité des facteurs de risque,% vs%; P & lt; Conclusion L’utilisation de ce test pour la détermination de la colonisation par le SGB pendant le travail est très sensible et spécifique et peut conduire à une réduction supplémentaire des taux de maladie néonatale à SGB.

Le streptocoque du groupe B Le SGB est la principale cause de morbidité et de mortalité infectieuses chez les nouveau-nés en Amérique du Nord La prévalence de la colonisation du SGB chez les femmes enceintes varie de% à , avec une incidence des maladies néonatales précoces par Deux approches de l’identification et de la prévention de la colonisation par le SGB ont déjà été recommandées par les CDC La première approche, à savoir l’approche basée sur le dépistage, consistait à dépister les femmes enceintes pour le SGB. en seconde semaine de gestation en cultivant des écouvillons vaginaux / anaux dans un bouillon sélectif et en administrant de la pénicilline intrapartum ou de l ‘ampicilline à toutes les femmes colonisées ou accouchant La deuxième approche, à savoir l’ approche prophylactique la base des facteurs de risque connus Dans les lignes directrices révisées, l’approche de dépistage a été recommandée comme approche de première L’approche basée sur les risques suggérée pour être utilisée comme sauvegarde dans des situations spécifiques Bien que les méthodes préventives actuelles aient été très efficaces, la méthode de culture présente les limites suivantes: elle nécessite ⩾ h, elle a une valeur prédictive pour la colonisation GBS à l’accouchement entre% et% , les résultats du dépistage ne sont pas toujours connus du médecin au moment de l’accouchement, et certaines femmes ne subissent pas de dépistage Ainsi, certaines femmes peuvent ne pas être traitées convenablement pour la colonisation. Un test de dépistage rapide sensible qui pourrait détecter avec précision les femmes porteuses de SGB pendant le travail pourrait éviter le besoin d’un dépistage prénatal tout en réduisant le risque associé à l’antibioprophylaxie pour les femmes non colonisées. Les tests antérieurs disponibles sur le marché ont manqué de sensibilité et de spécificité. le test standard de culture en bouillon Les tests internes basés sur la PCR spécifiques au GBS ont démontré une meilleure sensibilité mais nécessitent procédures diagnostiquées qui ne sont pas facilement mises en œuvre dans les laboratoires cliniques IDI-Strep B Infectio Diagnostic est un test de diagnostic in vitro qualitatif pour la détection rapide du SGB dans les échantillons vaginaux / anaux des patientes enceintes. Le test utilise un test PCR pour amplifier le SGB ADN et sonde fluorogène pour détecter la cible GBS amplifiée Le test est réalisé sur l’analyseur automatisé SmartCycler Cepheid. Dans un essai expérimental à site unique, les amorces et la sonde sélectionnées ont donné une sensibilité de% d’échantillons dont les résultats ont été confirmés par culture, spécificité de%, une valeur prédictive négative NPV de%, et une valeur prédictive positive PPV de% pour détecter GBS par rapport aux résultats de culture La présente étude prospective multisite prospective a été entreprise pour établir la performance analytique de IDI-Strep B dans la détermination intrapartum Colonisation de GBS de femmes dans diverses conditions cliniques

Méthodes

Tous les échantillons prénataux et chacun des deux échantillons d’écouvillon intrapartum du vagin distal et de l’anorectum ont été inoculés dans un milieu de bouillon sélectif approuvé par la Food and Drug Administration des États-Unis et recommandé par le CDC pour une utilisation clinique de routine: Todd- Le bouillon Hewitt Difco Laboratories, additionné de gentamicine μg / mL et d’acide nalidixique μg / mL ou de bouillon Lim Broth Todd-Hewitt avec μg / mL d’acide nalidixique et μg / mL de colistine; PML Microbiologicals ou BBL Inoculation a été suivi par une incubation pendant une nuit et sous-culture à% gélose au sang de mouton pour – h à ° C avec% CO Identification spécifique des colonies suggérant GBS a été fait avec un kit d’agglutination de lame commerciale PathoDx; Produits diagnostiques Si le GBS n’a pas été identifié après incubation sur plaque de gélose au sang de mouton, la plaque a été réincubée et réexaminée à hPrincipe du test IDI-Strep B Le mélange maître PCR contenait tous les réactifs nécessaires à l’amplification du gène GBS cfb, si possible, et du modèle de contrôle interne L’amplicon GBS est un fragment d’ADN -bp Le contrôle interne est un fragment d’ADN -bp constitué d’une séquence -bp non trouvée dans le GBS flanqué de la séquence complémentaire de chacune des amorces spécifiques au GBS L’ADN amplifié a été détecté avec des sondes d’hybridation marquées avec des fluorophores moléculaires trempées dapoxetinefr.com. Les fluorophores attachés à l’extrémité des balises étaient la carboxyfluorescéine et la tétrachlorofluorescéine pour la détection des amplicons GBS et des amplicons témoins internes, respectivement. Les hybrides balise-cible fluorescent aux longueurs d’onde caractéristiques du fluorophore utilisé dans chacune des balises moléculaires particulières utilisées L’amplification concomitante de Le contrôle interne permet la vérification de l’efficacité de la PCR et avertit l’utilisateur de la présence d’une inhibition significative de la PCR dans l’échantillon de testPrincipe de fonctionnement de l’analyseur automatisé SmartCycler Le fonctionnement du SmartCycler est basé sur le refroidissement / chauffage intelligent contrôlé par microprocesseur Module de réaction optique I-Core Chaque bloc de traitement SmartCycler contient des modules I-Core programmables, contrôlés indépendamment, chacun avec un site de réaction. Les blocs de traitement SmartCycler peuvent être connectés en chaîne, permettant l’analyse simultanée d’échantillons discrets. randomized pour le test IDI-Strep B a été testé selon les instructions du fabricant En résumé, l’écouvillon a été placé dans un tube contenant un tampon d’échantillon, laissé à température ambiante pendant min et vortexé à grande vitesse pour s aliquote A -μL était alors ajouté au tube de lyse et vortexée pendant min à haute vitesse, suivie par ce Le spécimen a été chauffé à ° C pendant min et placé sur de la glace. A partir de ce tube, des micropipettes μL et des pointes de pipettes bloquées par filtre du lysat cellulaire brut ont été transférées à un tube de mélange maître IDI-Strep B, préalablement reconstitué en ajoutant μL de diluant, agité au vortex pendant s et placé à ° C dans les blocs de refroidissement SmartCycler jusqu’au chargement de l’instrument. Le lysat restant a été stocké à – ° C pour utiliser ultérieurement si nécessaire Le tube de réaction chargé a été centrifugé dans une microcentrifugeuse spécialement adaptée et fournie avec le SmartCycler avant chargement. Dans des étapes séparées et similaires, les contrôles positifs et négatifs de IDI-Strep B ont été reconstitués avec μL de diluant. placé à ° C dans les blocs de refroidissement jusqu’au moment de charger sur l’instrument Chaque tube de réaction a été chargé dans un module I-Core du SmartCycler, et l’analyse a été réalisée conformément au SmartCycle. La partie inutilisée de chaque lysat a été congelée si nécessaire pour les retester. Définitions et traitement des résultats discordants Un résultat IDI-Strep B très positif a été défini comme un résultat positif par IDI-Strep B en accord avec les résultats de culture. résultat IDI-Strep B vrai-négatif a été défini comme un échantillon avec un résultat négatif par IDI-Strep B qui était en accord avec les résultats de culture Les résultats discordants ont été définis comme résultats initiaux par IDI-Strep B et culture qui n’étaient pas d’accord IDI-Strep B Les lysats congelés provenant des échantillons non résolus ont été retestés avec des tests positifs et négatifs. contrôlesAnalyse statistique Les résultats obtenus avec IDI-Strep B ont été comparés à ceux obtenus par le test standard de culture en bouillon. La sensibilité et la spécificité de l’IDI-Strep B, un Le test was a été utilisé pour comparer les différences de sensibilité, de spécificité, de VAN et de VPP pour les approches IDI-Strep B, la culture prénatale et l’approche des facteurs de risque par rapport à culture intrapartum P & lt; était considéré comme significatif

Résultats

Il y avait des femmes recrutées dans l’étude, soit n’ont pas reçu d’écouvillonnage intrapartum ou ont subi des écouvillonnages intrapartum traités, et d’autres femmes ont été éliminées en raison d’écarts par rapport au protocole de l’étude des femmes avaient des échantillons testés par culture & gt; h après la collecte, ont eu des réactifs de différents lots mélangés, et ont eu des échantillons obtenus sur une semaine entière qui ont été groupés Ainsi, les femmes enrôlées% des personnes recrutées ont été incluses dans l’analyse primaire La période gestationnelle médiane à l’accouchement était de Tableau La période gestationnelle médiane à la collecte des échantillons était de plusieurs semaines Le taux de colonisation antepartum variait de% à% le test IDI-Strep B comparé à la culture sur les sites participants est présenté dans le tableau La sensibilité de l’IDI-Strep B varie de% à%, la spécificité varie de% à%, la VPP varie de% à% et la VAN varie de % à% L’inclusion des données des femmes ayant des violations du protocole dans une analyse en intention de traiter n’a entraîné aucun changement significatif dans les résultats globaux. ivité,%; [% CI, -]; spécificité,% [% CI, -]; PPV,% [% CI, -]; et VAN,% [% CI, -]

Vue de la table largeTarifs de la colonisation intrapartum avec les streptocoques du groupe B chez les patients éligibles dans les sites d’étude participantsTable View largeTarifs de la colonisation intrapartum avec les streptocoques du groupe B chez les patients éligibles dans les sites d’étude participants

Tableau View largeTélécharger une diapositive Comparaison des taux de colonisation avec les streptocoques du groupe B dans les lieux d’étude participantsTable Agrandir la photoTélécharger une diapositiveComparaison des taux de colonisation avec les streptocoques du groupe B dans les lieux d’étude participants

Tableau View largeTélécharger les caractéristiques de performance du test IDI-Strep B pour la détection intrapartum de streptocoques du groupe B, comparée à la culture intrapartum, dans des échantillons vaginaux et anaux appariés obtenus chez des femmes enceintesTable Voir les caractéristiques du test IDI-Strep B pour l’intrapartum détection de streptocoques du groupe B, par rapport à la culture intrapartum, dans des échantillons vaginaux et anaux appariés obtenus chez des femmes enceintes. Des résultats discordants pour des échantillons négatifs pour la culture et positifs pour IDI-Strep B ont été obtenus. considéré comme ayant des résultats IDI-Strep B réellement faux positifs sur la base de résultats de culture négatifs. Figure 9 Neuf échantillons avaient des résultats positifs en culture et négatifs par IDI-Strep B, et ces spécimens étaient tous considérés comme ayant un IDI faux négatif. Résultats de Strep B Dix échantillons étaient initialement non résolus équivoques Neuf de ces spécimens ont été résolus à nouveau avec IDI-Strep B spécimens étaient négatifs selon la culture et IDI-Strep B, et l’échantillon était positif pour GSB selon la culture et IDI-Strep B, alors que l’échantillon est resté non résolu Durée de stockage des spécimens jusqu’à h n’a pas été associé à une variation des taux de résultats discordants non indiqués

Figure Vue largeDownload slideRésolution des résultats discordants pour les échantillons sur écouvillon jugés négatifs pour le streptocoque du groupe B GBS par culture et positif pour le SGB par IDI-Strep BFigure Voir grandDownload slideRésolution des résultats discordants pour les échantillons sur écouvillon déterminés négatifs pour les streptocoques du groupe B GBS par culture et positif pour le SGB par IDI-Strep Des substances potentiellement interférentes (p. ex. sang, fèces, liquide amniotique ou méconium) ont été signalées pour% des échantillons recueillis. En% des cas, une substance potentiellement interférente a été signalée; en% des cas, des substances potentiellement interférentes ont été signalées; et dans% des cas, ⩾ des substances potentiellement interférentes ont été notées sur l’échantillon collecté. Parmi les échantillons initialement non résolus, il n’y avait pas de substances potentiellement interférentes dans les échantillons, de liquide amniotique et une combinaison de substances potentiellement interférentes dans l’échantillon. être résolus, aucune substance potentiellement interférente n’a été observée. La présence de substances potentiellement interférentes n’a pas affecté les caractéristiques de performance des données IDI-Strep B non montrées. Un dépistage de la culture antitumorale a été réalisé chez les femmes% Dans un autre%, les décisions Facteurs de risque sans tableau de dépistage Comparativement aux résultats de la culture intrapartum, IDI-Strep B était supérieur aux cultures prénatales et prédisait le statut intrapartum par l’utilisation de facteurs de risque Pour les femmes dépistées avant l’accouchement, le statut de colonisation changeait entre le dépistage antepartum et intrapartum. ceux-ci, le statut de la colonisation chang La sensibilité des cultures antepartum à la prédiction des résultats de la culture intrapartum variait de% à% dans les centres participants

Tableau View largeTélécharger les caractéristiques de performance du test IDI-Strep B, la culture antepartum, et l’utilisation de facteurs de risque, par rapport à la culture intrapartum, dans la détermination de la colonisation avec streptocoques du groupe B pour les femmes enceintesTable caractéristiques du test IDI-Strep B, antepartum la culture, et l’utilisation de facteurs de risque, par rapport à la culture intrapartum, dans la détermination de la colonisation par les streptocoques du groupe B pour les femmes enceintes

Discussion

Nous avons montré que le test moléculaire IDI-Strep B est sensible et spécifique, comparé à la culture, et qu’il répond aux critères définis par le CDC. En outre, en utilisant le SmartCycler, qui a la capacité de traiter plusieurs échantillons simultanément, ceci Cette étude ne fournit pas d’informations sur la faisabilité de la mise en œuvre de tests rapides, car les échantillons intrapartum ont été mis en lots. Cependant, la courte durée du test IDI-Strep B -min total est avantageux pour le test intrapartum Le réglage dans lequel ce test est appliqué et le coût du test devraient influencer sa mise en œuvre clinique globale. Le test serait utile dans les contextes cliniques suivants: quand il n’y a pas de possibilité d’obtenir des cultures avant la livraison ou les résultats de la culture ne sont pas disponibles au moment du travail; le dépistage prénatal systématique dans les centres cliniques où les échantillons peuvent être immédiatement analysés pour fournir un délai d’exécution global de ⩽ h; Un laboratoire interne ou à proximité avec un court délai d’exécution du transport serait nécessaire pour répondre aux besoins cliniques du dépistage intrapartum de routine général pour faciliter la prise de décision concernant l’administration. des antibiotiques Pour les femmes qui accouchent avant que le résultat du test IDI-Strep B soit connu, la disponibilité du résultat peut toujours être utile pour déterminer si les nourrissons livrés sont à risque de maladie à SGB Dans notre étude, ~% de tous les échantillons étaient initialement non résolus par l’utilisation d’IDI-Strep B, conduisant à des tests supplémentaires, ce qui peut retarder les résultats pour ce sous-groupe de patients. Un autre inconvénient de l’utilisation du test rapide est que les isolats ne seraient pas disponibles pour les tests de sensibilité chez les patients allergiques à la pénicilline. besoin d’un antibiotique prophylactique différent Pour ces patients, le dépistage prénatal par culture devra être poursuivi Enfin, dans les centres Le test de dépistage IDI-Strep B se comporte très bien, comparé à la culture intrapartum, dans tous les centres participants. le centre de Montréal, où le taux de positivité à la culture intrapartum était le plus bas parmi nos centres%, une faible probabilité pré-test entraînait vraisemblablement la faible VPP de ce centre. La variation des taux de colonisation du SGB chez les femmes enceintes ,, -]] Il n’y avait aucune différence évidente dans les procédures ou dans la méthodologie de culture qui pourrait expliquer la faible prévalence à Montréal. En outre, un sous-ensemble des spécimens de ce site avec des résultats négatifs a été réessayé au même niveau. traite un grand pourcentage de femmes vietnamiennes, chinoises et du Moyen-Orient, ce qui peut avoir contribué à Les taux faibles, qui sont similaires aux taux précédemment rapportés dans d’autres populations asiatiques Le test IDI-Strep B n’a pas été affecté par la présence de substances interférentes telles que le sang ou le méconium, ni les substances associées à la rupture des membranes. confirme le rapport précédent de Bergeron et al Tout aussi important, le test IDI-Strep B était supérieur pour prédire le statut de colonisation du SGB confirmé par culture intrapartum par rapport aux cultures prénatales ou l’utilisation de facteurs de risque. Les raisons des taux de positivité plus bas dans notre étude ne sont pas claires mais peuvent refléter la vraie sensibilité des cultures antepartum dans différents contextes cliniques ou des différences dans le patient. populations ou méthodes de collecte Des résultats similaires aux nôtres ont été relevés dans des études récentes Dans le premier article , La sensibilité calculée à partir des données de l’article de détection du SGB chez les femmes enceintes à la gestation de la semaine était de% IC, – La seconde étude n’a pas rapporté de sensibilité, mais la PPV avant l’accouchement était seulement%, comparé au% notre étude et% dans l’étude par Yancey et al Ces résultats suggèrent que moins de mères colonisées que supposé précédemment peuvent être détectées dans la pratique clinique au moment de l’accouchement au moyen de l’approche actuelle Ceci peut s’expliquer en partie par le Dans cette étude multicentrique prospective, nous avons montré que le test IDI-Strep B était très sensible et spécifique pour détecter le GBS à partir des échantillons vaginaux et anaux combinés obtenus à partir de la grossesse. La disponibilité d’un tel test pendant le travail peut conduire à une réduction supplémentaire des taux de maladie néonatale à SGB

Remerciements

Soutien financier Infectio Diagnostic et un prix de chercheur médical de l’Alberta Heritage Foundation for Medical Research à HDDConflit d’intérêt Tous les auteurs: No conflict

Maria Selma Restaurant, LLC – 1617 Richmond Ave, Houston Tx 77006
Website Developed by: E-nnovations Technologies and Marketing LLC