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Comparaison De La Réaction En Chaîne Polymérase Des Leucocytes Polymorphonucléaires Et Du Plasma Identifie Des Patients Qui Contrôlent L’infection De Cytomegalovirus Après La Transplantation De Cellules Hématopoïétiques

Nous avons identifié un sous-groupe de receveurs de greffe de cellules hématopoïétiques capables de contrôler l’infection par le cytomégalovirus au début de la transplantation de cellules hématopoïétiques sans traitement antiviral grâce à un test automatisé de réaction en chaîne par polymérase et un test de réaction en chaîne par polymérase qualitative sur les leucocytes polymorphonucléaires. des patients avaient un ADN de cytomégalovirus détecté par un test qualitatif de réaction en chaîne de la polymérase mais aucun ADN de cytomégalovirus n’a été détecté par le test automatisé; ce groupe a maintenu un pic de charge de cytomégalovirus plus faible, comparé au groupe de patients ayant un ADN de cytomégalovirus détecté par les deux tests P = 03, suggérant un degré plus élevé de reconstitution immunitaire fonctionnelle

dans le laboratoire de virologie clinique du Stanford University Hospital, à moins que le patient ne présente de la fièvre, des symptômes gastro-intestinaux ou des symptômes pulmonaires. Le traitement anti-CMV spécifique initié après un résultat Amplicor positif dépendait du degré de myéloablativité du traitement préparatoire. Pour les patients ayant reçu un schéma myéloablatif, 5 mg / kg de ganciclovir ont été administrés par voie intraveineuse deux fois par jour pendant 2 semaines. La posologie a été ajustée en fonction de la fonction rénale du patient et une fois par jour après la période de 2 semaines dystrophie. 450 mg de valganciclovir ont été administrés par voie orale deux fois par jour pendant 2 semaines. La posologie a été ajustée en fonction de la fonction rénale du patient et une fois par jour après la période de 2 semaines. un résultat négatif au test Amplicor a été obtenu. La ciclosporine ou FK-506 et le méthotrexate ont été administrés De plus, la prednisone a été incluse dans le schéma prophylactique des patients ayant reçu des allogreffes de sang périphérique mobilisés. Nous avons utilisé qualPCR pour surveiller la réactivation du CMV au cours des 100 premiers jours après HCT ADN CMV dans les PMN à des intervalles hebdomadaires, débutant le jour de HCT Pour les échantillons de qualPCR, une PCR quantitative en temps réel a été réalisée pour déterminer le nombre de copies d’ADN de CMV par 1 × 105 PMNs [11] PMNs ont été séparés des PBMCs par Lymphoprep Axis. Shield, et la pureté de la séparation a été vérifiée par cytocentrifugation ADN a été purifié à partir de PMN, et qualPCR et PCR en temps réel ont été effectuées comme décrit ailleurs [11] Le test de Wilcoxon a été utilisé pour comparer la différence en temps réel Niveau d’ADN de CMV détecté entre les groupes qualPCR et Amplicor et les groupes qualPCR et Amplicor JMP, version 5012; SAS Institute Un niveau d’ADN du CMV de 3 copies par 1 × 105 PMN était le bas de la courbe d’étalonnage pour le test PCR en temps réel et était considéré comme la limite de détection pour le test; par conséquent, les patients ayant un niveau d’ADN de CMV ⩾3 copies pour 1 × 105 PMN ont été exclus des comparaisons du niveau d’ADN du CMVRésultats Un groupe de 54 receveurs HCT séropositifs au CMV a été observé pendant les 100 premiers jours après l’utilisation de HCT Amplicor pour surveiller l’ADN du CMV dans Des échantillons de plasma et de qualPCR ont été utilisés pour surveiller l’ADN du CMV dans les PMN pour détecter une infection virale active. Les patients présentant un ADN du CMV détecté dans au moins 1 échantillon étaient considérés comme ayant une infection active au CMV. infection à CMV active non expérimentée Ainsi, sur les 54 patients, 32 59% étaient dans le groupe qualPCR et Amplicor, 17 31% dans le groupe qualPCR et Amplicor, et 5 9% dans l’ADN de qualPCR-CMV non détecté par qualPCR et groupe Amplicor Le nombre médian de PMN ou d’échantillons de plasma testés par qualPCR ou Amplicor par patient était de 4 échantillons intervalle interquartile [IQR], 3-7 échantillons et 10 échantillons IQR, 8-11 échantillons, respectivement Dans 66% des patients le groupe qualPCR et Amplicor, ADN CMV a été détecté par qualPCR avant qu’il puisse être détecté par Amplicor Dans la majorité des situations 70% dans lesquelles l’ADN du CMV a été détecté par Amplicor avant qu’il ne soit détecté par qualPCR, un test qualPCR n’a pas encore été effectué ou n’a pas été réalisée dans le passé ⩾10 jours avant le résultat positif d’Amplicor Aucun patient de cette étude n’a détecté l’ADN du CMV par Amplicor sans avoir au moins 1 échantillon avec un résultat positif au test qualPCR. Parmi les 9 patients les groupes qualPCR et Amplicor qui n’avaient qu’un seul échantillon avec un résultat positif au test qualPCR, 3 avaient le résultat positif de qualPCR en même temps qu’un résultat Amplicor positif, 4 avaient le résultat positif de qualPCR en même temps qu’un résultat d’Amplicor négatif, et 2 a eu le résultat positif de qualPCR à un moment où un test Amplicor n’a pas été effectué. En outre, il y avait 8 patients dans le groupe qualPCR et Amplicor qui avaient seulement 1 échantillon avec un résultat Amplicor positif pour déterminer si les différences dans les niveaux globaux d’infection à CMV ont contribué à la différence entre les résultats positifs par les deux méthodes de PCR ou seulement par qualPCR, nous avons quantifié et comparé les niveaux d’ADN de CMV associé aux PMN entre les groupes utilisant le PCR en temps réel. Le niveau d’ADN dans le groupe qualPCR et Amplicor a atteint un sommet de 67 copies pour 1 × 105 PMNs IQR, 18-89 copies pour 1 × 105 PMN, comparativement à 10 copies pour 1 × 105 PMNs IQR, 6-38 copies pour 1 × 105 PMN dans Par contre, les niveaux d’ADN du CMV au moment du premier résultat positif du test QUALPCR étaient similaires dans les deux groupes, avec une médiane de 21 copies pour 1 × 105 PMN IQR , 9-81 copies pour 1 × 105 PMN dans le groupe qualPCR et Amplicor et 8 copies pour 1 × 105 PMNs IQR, 5-23 copies pour 1 × 105 PMN dans le qualPCR et le groupe Amplicor P = 11, par Wilcoxon rang- test de somme

PMN des leucocytes olymorphonucléaires, par groupe de détection PCR CMV DNA Le niveau d’ADN CMV par 1 × 105 PMN au moment du premier résultat PCR positif et le pic d’ADN CMV dans les PMN au cours des 100 premiers jours après HCT dans le groupe avec positif Résultats qualitatifs de PCR et d’Amplicor à gauche et dans le groupe avec résultats qualitatifs de PCR positifs et résultats d’Amplicor négatifs à droite Le niveau médian d’ADN de CMV dans chaque groupe est représenté par la ligne horizontale noire. Résultats d’amplicor n = 29 que dans le groupe avec des résultats de PCR qualitatifs positifs et des résultats d’Amplicor négatifs n = 13; P = 03 Il n’y avait pas de différence dans le niveau d’ADN du CMV entre le groupe avec PCR qualitative positive et Amplicor résultats n = 27 et le groupe avec des résultats PCR positifs positifs et négatifs Résultats Amplicor n = 13 lors du premier résultat PCR positif positif P = 11Durant les 100 premiers jours après HCT, il y avait 1 cas de maladie à CMV dans le groupe qualPCR et Amplicor au jour 55 après HCT; cependant, il n’y a pas eu de cas de maladie à CMV dans les groupes qualPCR et Amplicor ou dans les groupes qualPCR et Amplicor durant cette période. Une différence importante entre les deux groupes avec l’ADN détectable du CMV était que les patients des groupes qualPCR et Amplicor Traitement par le CMV après leur premier résultat positif d’Amplicor, bien que les patients des groupes qualPCR et Amplicor ne soient pas traités, car le traitement par anti-CMV préventive a été déterminé uniquement par un résultat Amplicor positif. Discussion L’utilisation de qualPCR en association avec Amplicor a permis d’identifier groupe de patients qualPCR et groupe Amplicor qui contrôlaient une infection à CMV active sans traitement antiviral précoce après HCT pendant moins de 100 jours après HCT L’observation que le niveau d’ADN du CMV était plus élevé dans les groupes qualPCR et Amplicor que dans les groupes qualPCR et Amplicor-, bien que les niveaux d’ADN de CMV au moment du premier résultat positif de qualPCR étaient semblables à la figure 1, suggère que le Les groupes qualPCR et Amplicor ont maintenu des taux plus faibles de virus sans le bénéfice de la thérapie antivirale. Nous prévoyons que les patients des groupes qualPCR et Amplicor ont bénéficié d’un degré de reconstitution immunitaire et de fonction plus élevé que ceux du groupe qualPCR et Amplicor. Il est intéressant d’évaluer la réponse des lymphocytes T spécifiques du CMV en conjonction avec les tests Amplicor et qualPCR pour étudier les mécanismes par lesquels les patients du groupe qualPCR et du groupe Amplicor contrôlaient le CMV après HCT, comparativement aux patients du groupe qualPCR et Amplicor. Au cours de la phase latente de l’infection, l’ADN du CMV est retrouvé dans les progéniteurs myélomonocytaires dérivés de la moelle osseuse, les PBMC et les macrophages tissulaires et dendritiques. cellules [13, 14] En revanche, les PMN n’hébergent pas l’ADN du CMV au stade latent de l’infection [15] Détection du CMV dans les PMNs rema L’une des méthodes les plus précoces et les plus sensibles pour détecter la réactivation virale [16] Le CMV infectieux, les antigènes CMV et l’ADN du CMV peuvent être détectés dans les PMN lors d’une infection virale active chez des individus immunodéprimés, même si ces cellules ne semblent pas réplication virale productive [17-24] L’acquisition de l’ADN viral par PMN provient probablement du rôle de ces cellules comme phagocytes professionnels dans la défense de l’hôte Bien que l’ADN du CMV ait été détecté dans des échantillons de plasma et de sérum de patients immunodéprimés L’ADN du CMV n’a pas été détecté dans des échantillons de plasma ou de sérum d’individus séropositifs, ce qui suggère que la détection de l’ADN du CMV avec Amplicor et qualPCR est révélatrice de la réplication virale [14]. la moitié des patients du groupe qualPCR- et Amplicor n’est pas claire, car les données critiques de la PCR n’étaient pas disponibles dans les 100 jours suivant HCT Le dernier résultat du test Amplicor pour 3 des 17 patients du groupe qualPCR et Amplicor a été obtenu 48, 55 ou 59 jours après HCT; les 14 autres patients avaient des échantillons qui ont été testés entre les jours 80 et 100 après HCT De même, un test PCR final a été réalisé entre 48 et 70 jours après HCT pour la moitié des patients dans les groupes qualPCR- et Amplicor- Amplicor 5 patients et qualPCR pour 3 des 5 patients; les patients restants ont eu un test PCR final entre les jours 70 et 100 après HCT Amplicor pour 3 patients sur 5 et qualPCR pour 2 patients sur 5 Bien que certains de ces patients soient devenus positifs au CMV 100 jours après HCT, aucun d’eux n’a développé la maladie CMV L’identification d’un nombre important de patients dans les groupes qualPCR et Amplicor révèle que la réplication du CMV est souvent contrôlée chez les patients qui ont réactivé l’infection par le CMV. Des études prospectives supplémentaires concernant les mécanismes de contrôle de la réplication du CMV sont justifiées

Remerciements

Nous remercions les Drs Jerry Halpern et Ruby Wong, pour leurs conseils statistiques, et Kate Tierney et Luci Fetzko, pour leur aide financière. National Institutes of Health P01 CA49605 à ESM et JMYB, R01 AI30363 à ESM, et R01 AI33852 aux conflits d’intérêts ESMPotential Tous les auteurs : pas de conflits

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