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Diminution de la concentration minimale inhibitrice de la pénicilline dans des isolats de Streptococcus pneumoniae séquentiels identiques provenant de nourrissons sains colonisés

Nous avons surveillé le moment de l’acquisition de la colonisation nasopharyngée de Streptococcus pneumoniae chez des nourrissons sains durant leurs premières années de vie finasteride. S pneumoniae a été isolé au moins une fois chez% des nourrissons âgés de 24 mois à 24 mois. Au cours de cette étude, nous avons identifié des isolats pneumococciques séquentiels du même sérotype chez les nourrissons, dans lesquels la concentration inhibitrice minimale de la pénicilline a augmenté au fil du temps. Chez les nourrissons, les isolats séquentiels étaient identiques, déterminés par Électrophorèse sur gel de champ Les isolats séquentiels S pneumoniae nasopharyngés de certains nourrissons en bonne santé ont démontré une dérive dans les valeurs de la CMI de la pénicilline au fil du temps, de la pénicilline à la pénicilline

Le nombre d’infections causées par des souches de Streptococcus pneumoniae ayant une sensibilité réduite à la pénicilline a continué d’augmenter dans le monde entier. Cette prévalence accrue de S pneumoniae résistant à la pénicilline a suscité un regain d’intérêt pour l’épidémiologie de cet organisme. S pneumoniae résistant chez les enfants pour déterminer la prévalence de la colonisation avec DSRP La prévalence de la colonisation nasopharyngée avec DSRP varie de% à% dans ces études Nous rapportons ici l’acquisition et le calendrier de la colonisation avec DSRP dans une population de Nous avons découvert la dérive de la pénicilline dans l’électrophorèse en champ pulsé. S pneumoniae séquencé par PFGE chez les nourrissons À notre connaissance, d’après la revue Medline de la littérature en anglais, ceci est le premier rapport pour décrire le pénic La dérive des CMI d’illin dans des isolats de S pneumoniae identiques à l’ECPP au fil du temps

Sujets et méthodes

Cette étude a été menée au Children and Youth Project, une clinique pédiatrique universitaire qui fournit des soins complets longitudinaux à une population défavorisée du centre-ville de Jefferson County Louisville, KY Des nourrissons disponibles qui ont visité le Children and Youth Project pendant la période d’inscription entre les mois de novembre et de juin, étaient inscrits:% étaient noirs et% étaient blancs et% étaient d’autres minorités, une répartition raciale identique à celle de l’ensemble de la population de la clinique, y compris les personnes âgées; Tous les enfants de l’étude provenaient de ménages ayant un revenu inférieur à la norme fédérale établie et résidaient dans un quartier défavorisé du comté de Jefferson. Le niveau socioéconomique et la prépondérance raciale étaient en accord avec ceux de l’ensemble de la population clinique et représentaient toutes les familles. même zone géographique Si un parent refuse d’inscrire son enfant à l’étude, la raison n’en est pas enregistrée. Les enfants atteints de troubles hémorragiques ou immunodéprimés, y compris ceux nés de mères séropositives ou porteurs chroniques d’hépatite B, ont été exclus. Procédures microbiologiques Les cultures nasopharyngées ont été recueillies à l’aide d’un écouvillon flexible à base de Dacron et ont été immédiatement inoculées à de la gélose au trypticase soya contenant du sang de mouton. Deux infirmières de recherche ont tenté d’obtenir des écouvillonnages nasopharyngiens en série. qui ont été préalablement formés à la technique appropriée Tous les spécimens ont été incubés à ° C en% CO pendant h Colonies pour lesquelles S pneumoniae était suspectée ont été repiquées et identifiées par susceptibilité à l’optochine Chaque isolat a ensuite été mis en suspension dans du sang de mouton entier et conservé à – ° CSusceptibility procédure standard de microdilution en bouillon en utilisant un bouillon de Mueller-Hinton ajusté aux cations complété avec du sang de cheval lysé à une concentration finale de% L’inoculum pour ces tests a été préparé en décongelant les suspensions stockées et en sous-culture. Dans le même milieu, les isolats ont été suspendus à la densité d’un étalon McFarland et ont été testés pour la sensibilité à la pénicilline et au céfotaxime. Les seuils de résistance à la pénicilline définis par le National Committee for Clinical Laboratory Standards sont les suivants: sensible, pénicilline MIC & lt; pg / ml; résistance intermédiaire, pénicilline MIC de – μg / mL; très résistant, pénicilline MIC & gt; Les isolats μg / mLAll ont été congelés et sérotypés plus tard par la réaction de Quellung. R, Centre collaborateur autrichien pour la recherche sur les pneumocoques, Université de Pennsylvanie Des réactions croisées entre différents types capsulaires pneumococciques ont été identifiées en nommant les deux types. Des études d’électrophorèse sur gel de champ ont été effectuées sur tous les isolats de nourrissons ayant une colonisation persistante avec le même sérotype dans lequel les valeurs de la pénicilline MIC augmentaient avec le temps. Ceci a été réalisé avec un système disponible dans le commerce Gene-Path, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA aux instructions fournies par le fabricant, avec des modifications mineures Des isolats de S pneumoniae ont été cultivés sur agar trypticase soja avec% de sang de mouton pendant une nuit à ° C. Puis plusieurs colonies isolées ont été inoculées à mL de bouillon de perfusion cerveau-coeur et incubées à la même température avec agitation pour – h Ces cultures ont été centrifugées, remises en suspension dans des Les bactéries ont été lysées en plaçant les bouchons d’agarose dans du tampon de lyse contenant du lysozyme à ° C; Après digestion des parois cellulaires, les bouchons ont été lavés et digérés avec la protéinase K pendant une nuit à ° C. Après des lavages supplémentaires, les bouchons ont été incubés pendant une nuit à température ambiante avec l’enzyme de restriction SmaI, puis lavés. L’électrophorèse a été réalisée dans un gel d’agarose × -cm. Le gel a été coloré avec une solution de SYBR Green Molecular Probes, Eugene, OR pour h, puis examiné sur un transilluminateur UV et photographié.

Résultats

Parmi les cultures possibles de la population de recrutement, un total de cultures a été obtenu entre novembre et août. Parmi les enfants étudiés, il y a eu des visites, des visites et des visites au cours de la période de suivi. Quarante-huit pour cent des Dix pour cent des nourrissons ont été suivis pendant des mois. Colonisation nasopharyngée S pneumoniae a été isolé au moins une fois par% des nourrissons La colonisation à n’importe quel moment pendant la période d’étude uniquement avec des isolats sensibles à la pénicilline Quatre isolats résistants à la pénicilline ont été prélevés sur ces nourrissons:% des isolats étaient moyennement résistants et% étaient hautement résistants. Bien que ces isolats représentaient différents sérotypes pneumococciques, le pourcentage des isolats résistants à la pénicilline On a déterminé que les isolats hautement résistants étaient de sérotype F, B ou A Les RSP du même sérotype n’étaient pas apparentés, n’étaient pas voisins et ne fréquentaient pas la même garderie. Résistance à la pénicilline et dérive du CMI Pour les nourrissons, des isolats DSRP séquentiels du même sérotype ont été récupérés. Les isolats de ces nourrissons présentaient une augmentation de la pénicilline. Les valeurs de PFGE ont été mesurées sur des isolats de ces nourrissons. Chez ces nourrissons, les isolats séquentiels étaient identiques à ceux du PFGE. Il est intéressant de noter que tous les isolats proviennent de patients et étaient identiques au PFGE, mais ces enfants n’étaient ni apparentés ni Avaient-ils fréquenté la même garderie? En général, ni la fréquentation des garderies, ni l’utilisation d’antibiotiques étaient un facteur important pour ces patients. Les patients et les seuls nourrissons qui avaient pris des antibiotiques au moins avant les isolements séquentiels étaient les patients. qui avait été en garderie au moment où les isolats ont été obtenus

Discussion

La colonisation nasopharyngée avec DSRP chez l’enfant a été largement étudiée La plupart de ces études ont documenté la prévalence de la colonisation DSRP et les facteurs de risque associés. Nous fournissons les premières données d’une étude qui examine le moment de l’acquisition du DSRP et la dynamique de cette acquisition. Au cours de cette étude, nous avons découvert la découverte unique de la dérive de la pénicilline MIC dans des isolats de Spneumoniae séquencés PFGE-identiques de quatre nourrissons. La majorité de nos nourrissons colonisés ont été colonisés par mois, et % des enfants colonisés ont acquis les organismes par année d’âge Le moment de l’acquisition des DSRP dans notre étude était cohérent avec celui d’une étude précédente , qui démontrait un% du taux de portage dès l’âge de deux mois. étude ont été colonisées par des organismes résistants à la pénicilline en mois d’âge. Bien que la colonisation par le DSRP ait été détectée en début de Ces données sont en accord avec celles d’autres études qui montrent un pic de colonisation vers la deuxième année de vie la colonisation par le DSRP n’était pas toujours persistante et la colonisation subséquente par la pénicilline Des souches sont survenues chez certains nourrissonsNotre taux de récupération peut également avoir été affecté par les variations saisonnières Dans notre étude,% des isolats ont été récupérés entre décembre et mars. Les variations saisonnières ont été étudiées chez les enfants âgés de – ans; Comme le pourcentage de patients éligibles a été inclus dans l’étude, un biais de sélection secondaire à notre nombre limité de patients et de cultures a pu influencer les résultats de cette étude. colonisation persistante avec le même sérotype, les CMI des isolats suivants augmentaient avec le temps. Les souches pneumococciques génétiquement différentes peuvent avoir le même type capsulaire, ce qui suggère que les enfants porteurs d’un sérotype particulier peuvent être colonisés ou recolonisés avec des souches différentes . Dans notre étude, les patients ont été colonisés séquentiellement avec le même sérotype et souche, tel que déterminé par typage moléculaire. Nous suggérons que la dérive dans la CIM peut être due à des mutations qui provoquent le changement d’un acide aminé dans la protéine liant la pénicilline. n’étaient pas significativement exposés aux antibiotiques, il est donc difficile d’expliquer pourquoi cette mutation se serait produite sans avantage clémente Une étude dans une garderie a montré plusieurs clones génétiques de DSRP qui sont apparus simultanément pendant les périodes d’utilisation intensive d’antibiotiques. Des clones individuels de DSRP ont été transmis de l’enfant à l’enfant Il est possible que utilisation dans la population générale Des mutations dans lesquelles seuls ou quelques acides aminés sont supprimés ou ajoutés n’affectent pas nécessairement le profil PFGE, sauf si cette substitution se produit sur un site de restriction Des études futures sont nécessaires pour comparer les profils des empreintes génétiques des protéines de liaison à la pénicilline isolats Ces études peuvent révéler le mécanisme par lequel ce phénomène de dérive MIC survient. En résumé, nos résultats démontrent que le DSRP est acquis dès l’âge de quelques mois et atteint un pic au début de l’enfance. Cette colonisation précoce avec DSRP peut exposer ces nourrissons à un risque d’otite moyenne. infections plus graves dues à des isolats de S pneumoniae nasopharyngé de certains nourrissons en bonne santé démontrent une résistance accrue à la pénicilline au fil du temps

Remerciements

Nous remercions Robert Austrian, MD Centre de collaboration OMS pour la référence et la recherche sur les pneumocoques, Département de recherche, Université de Pennsylvanie, Département de médecine de recherche, Faculté de médecine de l’Université de Pennsylvanie, Philadelphie, PA pour le sérotypage de nos isolats; et Mary Ball et Alice Gittings pour le recrutement de patients et l’assistance technique

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